一．预约与收费规则

1.仪器使用时间：每周四和周六。 10：00-16：30；(9:00-10:00为机器启动及光路校正时间，16:30后为仪器管路清洗消毒时间)；

2.预约请直接联系崔娜进行人工确认。

3.使用仪器前请至少提前一周向仪器负责人预约，并告知仪器负责人具体实验内容，仪器负责人根据仪器使用情况安排上机时间，如取消预约须至少提前一天告知仪器负责人，否则一律按照2小时收费；

（仪器负责人：崔娜   联系电话：021-68582512  邮箱：cuina@sioc.ac.cn）

二．样品制备要求

1.上样前请针对不同的细胞样本进行相应处理，减少细胞粘连，使细胞形成单细胞悬液；

1.1.贴壁细胞消化后可用含2%FBS的PBS或无酚红RPMI-1640培养基重悬，禁止使用高糖培养基，以减少自发荧光干扰；

1.2.组织消化后因有许多DNA从死细胞中泄露，导致细胞粘连，请在消化液中加入DNaseI 25ug/ml+5mM MgCl2,并在后续抗体染色中往staining buffer中添加DNaseI 25ug/ml+5mM MgCl2；

2.细胞活力会直接影响分选后的细胞活性，同时死细胞会有较强的自发荧光干扰分选，因此必需用PI或7AAD染料区分死细胞，染色五分钟，离心2次，洗去染料，才能做后期荧光分选；

3.为保证分选效率，建议上样细胞浓度不低于1×107/ml；

4.为保证细胞活性，请将样品置于冰上；

5.实验对照设计：

5.1.转染荧光蛋白的细胞样品，需提供为转染的细胞样品以供校正

5.2.多种荧光抗体标记的样品，需要提供(a) 为染色的细胞样品   (b)每一种荧光抗体单独染色的样品，以供仪器校正和荧光补偿。

6.预实验设计：

6.1.荧光蛋白标记的细胞系可直接上机分选，不需要预实验；

6.2.从组织中分离的细胞尤其是含量稀少的细胞，请先做小规模的预实验，以测定细胞含量以及优化分选策略；

7.所有样品在上机前必须转移至带滤网的FACS管内上样（FALCON，货号：352235）；

三．样品收集

1.活细胞收集：收集样品可选用不同规格离心管（5ml、15ml、50ml）和细胞培养板，请在分选前往离心管中加入1-2ml含有20%FBS的培养基，培养板中加入覆盖底面积的量；

2.DNA分离：收集管中提前加入PCR mix或lysis buffer；

3.RNA分离：收集管中提前加入Trizol或RLT buffer；

四．荧光素选择

    实验采用多种荧光染色标记时，请用以下工具仔细对比，防止荧光发射光谱重叠，导致实验失败。

荧光光谱查看器：

http://www.bdbiosciences.com/cn/s/spectrumviewer

https://www.thermofisher.com/cn/zh/home/life-science/cell-analysis/labeling-chemistry/fluorescence-spectraviewer.html

五：MoFlo荧光通道信息：

六．样品信息表（上表）

分选实验室，请按照一下表格提供样品信息，以供分选是快速设定正确的荧光通道。

七．细胞分选所需时间参考 

八．数据备份及分析

    请自备空白光盘一张，用于拷贝实验数据，拷贝后请妥善保存实验数据。平台不承担任何因违反本

规定而导致的实验数据丢失、外泄等。严禁用U盘，擅自使用U盘者，将被禁用仪器3-6个月或取消仪器使用资格。

数据分析软件：Beckman Summit（可从Hu Lab拷贝）。